機能観察総合評価(Functional Observational Battery, FOB)は、ラット系統の行動および活動に関するさまざまなパラメータを記述する神経行動学的評価法です。NBRPラット(京都)では、以下の項目で構成されています:
機能観察総合評価(FOB)の観察手順
(1) ホームケージ観察
(動物を刺激しないよう注意しながら、ケージの外から観察する。動物には触れない。)
1) 姿勢:動物の姿勢に最もよく当てはまる語を次のリストから選ぶ(分類)。
S(座位・立位):座っている、または正常に立っている
A(睡眠):横になって丸まっている、またはうずくまっている
R(立ち上がり):後肢で立っている
H(猫背):歩行時も背中が丸く、腹部をかばっているように見える
L(横臥):横になり、四肢が宙に浮いている
F(伏臥):腹部を床に押しつけて体を広げている
C(カタレプシー):カタレプシー様の状態。姿勢はさまざまであるが、不自然な姿勢を保ち続けている
注:S、A、および軽度のRのみを正常とみなす。
2) 呼吸:呼吸の速さと深さに最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:正常
2:軽度の異常/速く浅い呼吸、徐呼吸(速く浅い呼吸、または遅い呼吸)
3:中等度の異常/頻呼吸、呼吸困難(非常に速く浅い呼吸、または非常に浅く苦しそうな呼吸)
4:重度の異常/喘鳴、開口呼吸(喘鳴、または口を開けた呼吸)
5:微弱な呼吸(ほとんど呼吸していない)
3) 間代性不随意運動:該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:なし/正常
2:口・顎の反復運動
3:四肢、耳介または頭部の攣縮
4:全身性の振戦
5:間代性痙攣
6:震え
4) 強直性不随意運動:該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:なし/正常
2:伸展性収縮(四肢の一部または全部が伸展して硬直する)
3:突発的な跳躍(四肢すべてが床から離れる)
4:強直性伸展痙攣
5:呼吸困難、発作または死亡を伴う強直性痙攣
5) 発声:自発的な発声の有無を確認し、該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:発声なし/正常
2:発声あり
6) 眼瞼閉鎖:ケージ内での動物の眼の閉じ具合に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:開眼
2:やや下垂/半閉眼(眼瞼がわずかに下がっている)
3:閉眼(眼瞼が閉じている)
(2) ハンドリング観察
(動物をケージから取り出して保持したときの反応を観察する。)
1) 反応性:動物をケージから取り出す際の容易さに最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:非常に容易(動物は座ったまま、持ち上げられるのに任せる)
2:容易/正常(動物は抵抗しない)
3:やや困難(ラットが立ち上がる)
4:困難(動物が身をすくめて硬直する、または走り回ってつかみにくい)
5:非常に困難(動物が攻撃する)
2) ハンドリング:ケージから取り出した後の動物の扱いやすさに最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:抵抗しない/非常に扱いやすい
2:鳴く、または鳴かないが軽い抵抗を示す。扱いやすい/正常
3:動物がすくんで動かない。手の中で硬直する
4:非常に困難(動物がもがく、身をよじる、苦しそうにする、咬もうとする)
3) 眼瞼閉鎖:手で保持したときの動物の眼の閉じ具合に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:なし/正常(開眼)
2:やや下垂/半閉眼(眼瞼がわずかに下がっている)
3:閉眼(眼瞼が閉じている)
4) 流涙:ラットを保持して眼の周囲を観察し、動物の状態に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:流涙なし/正常
2:眼の周囲のみ湿っている
3:眼から涙が流れている
5) 流涎:ラットを保持して口の周囲を観察し、動物の状態に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:流涎なし/正常
2:口の周囲のみ湿っている
3:口から唾液が流れている
6) 立毛:ラットを保持して被毛(立毛の程度)を観察し、動物の状態に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:なし/正常
2:頭部と背部(頭部と背部のみに軽度の立毛)
3:全身性(全身の立毛)
7) その他(記述で記録):被毛の汚れ、咬傷、爪の欠損、削痩(腹部が触れられる、脊椎の正中が突出する)または死亡に関する所見を詳細に記録する(所見)。
該当する行動が観察されない場合は、所見欄にマイナス記号(-)を記入する。
(3) 体温
サーミスタ温度計を用いて直腸温を測定する(測定値)。
(4) オープンフィールド観察
(動物を静かにフィールドの中央に置き、3分間にわたって以下の10項目を観察する。3分間の観察中に動物が動かない場合は、観察終了後にオープンフィールド内で軽く突いて運動の消失を確認し、記録する。)
1) 立ち上がり回数:3分間に動物が前肢を床から完全に離した回数と、壁に前肢をかけて立ち上がった回数をカウンターで数える(計数)。
2) 間代性不随意運動:該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:なし/正常
2:口・顎の反復運動
3:四肢、耳介または頭部の攣縮
4:全身性の振戦
5:間代性痙攣
6:震え
3) 強直性不随意運動:該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:なし/正常
2:伸展性収縮(四肢の一部または全部が伸展して硬直する)
3:突発的な跳躍(四肢すべてが床から離れる)
4:強直性伸展痙攣
5:呼吸困難、発作または死亡を伴う強直性痙攣
4) 歩行:動物の歩行に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(分類)。
N(正常):頭部は水平、腹部は床からわずかに浮き、歩行中に体がわずかに上下する
D(引きずり):体を引きずり、腹部が床に触れ、体がふらつく
H(後肢異常):後肢を広げる、または引きずり、体重を支えられない
HU(猫背):背中が丸い、またはうずくまっている
T(つま先歩行):つま先で歩く
A(運動失調):協調運動の障害。過度に揺れ、歩行時によろめいてふらつく
5) 運動量:歩行の様子は考慮せず、動物の運動量に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ。時間経過に伴う運動量の減少も考慮する(スコア)。
1:著しく減少
2:やや減少
3:正常
4:やや増加
5:著しく増加
6) 覚醒度:動物の活動性に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ。時間経過に伴う活動性の低下も考慮する(スコア)。
1:著しく低下(麻痺、昏睡)
2:中等度に低下(軽度の鈍麻、頭部のみ動かす)
3:やや低下(時に動かないが、探索行動は行う)
4:正常(警戒を保ちつつ探索行動を行う)
5:やや亢進(軽度の興奮または緊張。急に前方へ動いては静止する)
6:著しく亢進(強い警戒。走る、または急に体を動かす)
7) 常同行動:旋回、常同的な毛づくろい、鳴き声、頭を振る動作、その他の反復的・常同的な行動の有無を確認する(所見)。
該当する行動が観察されない場合は、所見欄にマイナス記号(-)を記入する。
8) 異常行動:常同行動を除く異常行動(身をよじる、後ずさりする、動作が苦しそう、甲高く鳴くなど)の有無を確認する(所見)。
該当する行動が観察されない場合は、所見欄にマイナス記号(-)を記入する。
9) 排便数:3分間の観察中にオープンフィールド内に排泄された糞の数を数える。観察後、敷き紙が汚れていれば交換する(計数)。
10) 排尿数:3分間の観察中にオープンフィールド内に残された尿の染みの数を数える。排尿しながら移動してできた染みは1つと数える。観察後、敷き紙が汚れていれば交換する(計数)。
(5) 刺激反応
1) 接近反応:先の鈍い物(ピンセットなど)の先端を動物の前方2〜3 cmまでゆっくり近づけ、4秒間保持する。その物に対する動物の反応に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:反応なし
2:ゆっくり近づき、においを嗅いで引き下がる/正常
3:ぴくつく(筋の緊張)
4:跳躍、咬みつき、鳴き声、攻撃などの激しい過剰反応を示す
2) 接触反応:先の鈍い物(ピンセットなど)で腹部に軽く触れたときの動物の反応に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:反応なし
2:ゆっくり後退する/正常
3:ぴくつく(筋の緊張)
4:跳躍、咬みつき、鳴き声、攻撃などの激しい過剰反応を示す
3) 眼瞼反射:先の鈍い物(ピンセットなど)で眼瞼に触れたときの動物の反射に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:瞬きしない
2:瞬きする/正常
4) 耳介反射:先の鈍い物(ピンセットなど)で耳介に触れたときの動物の攣縮反射に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:耳介が動かない
2:耳介が動く/正常
5) 音反応:動物の背部から約5 cmの位置でクリッカーを鳴らしたときの、動物の体の攣縮反射に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:反応なし
2:軽い反応、音を聞いている/正常
3:ぴくつく(筋の緊張)
6) 尾つまみ反応:ピンセットなどで尾の付け根をつまんだときの動物の疼痛反応に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:反応なし
2:振り返り、前へ動いて軽く鳴く/正常
3:ぴくつく(筋の緊張)
4:跳躍、咬みつき、鳴き声、攻撃などの激しい過剰反応を示す
7) 瞳孔反射:ペンライトで動物の眼を照らす(スコア)。
1:縮瞳しない
2:縮瞳する
8) 正向反射:動物を仰向けにして高さ30 cmから落としたときの反応に最もよく当てはまる項目を次のリストから選ぶ。動物が麻痺している場合や極めて状態が悪い場合は行わない(スコア)。
1:四肢で着地する/正常
2:四肢が同時に着地しない
3:横向きに着地する
4:背中から着地する
(6) 神経・筋機能の測定
1) 腹部筋緊張:動物を手で保持して腹筋に触れ、該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:抵抗なし(軟らかい)
2:正常(適度な硬さ)
3:強い抵抗(非常に硬い)
2) 四肢筋緊張:動物を手で保持して四肢の筋に触れ、該当する項目を次のリストから選ぶ(スコア)。
1:抵抗なし(軟らかい)
2:正常(適度な硬さ)
3:強い抵抗(非常に硬い)
3) 握力:小動物用握力測定装置(前肢用・後肢用)を用いる。測定者の力が装置に記録されないよう注意する(測定値)。
(1) ひずみゲージを水平に取り付けた金網に動物の前肢をかけさせる。
(2) 前肢が離れるまで、金網に沿って静かに後方へ引く。
(3) 装置に表示された最大値を記録する。
(4) 同様に、ひずみゲージを45度の角度で取り付けた金網に動物の後肢をかけさせる。
(5) 前肢、後肢それぞれ2回ずつ測定する。
(6) 単位はkgf(重量キログラム)とし、絶対値を記録して2回の測定値の平均を求める。
4) 着地開脚幅(測定値)
(1) 試験台に記録用紙を敷く。
(2) 動物の後肢の足底にインクを塗り、首または背中をつかんで持ち上げる。
(3) 動物が落ち着いた状態で、腹を下にして高さ30 cmから記録用紙の上に落とす。
(4) 上記を2回行う。
(5) 両踵の間の直線距離をミリメートル単位で測定し、絶対値を記録して2回の測定値の平均を求める。
(7) 瞳孔径
ミニマスタールーペを用いて瞳孔径を測定する(測定値)。